Жидкий азот, в котором на пункте искусственного осеменения хранится доставленное семя племенных быков, имеет температуру минус 196°. Попадание жидкого азота на кожу тела техника по искусственному осеменению может привести к тяжелому обморожению. При небрежном отношении к жидкому азоту могут наступить тяжелые последствия. Учитывая это, специалист занимающийся работой с глубоко замороженным семенем должен строго соблюдать технику безопасности.
Правила техники безопасности:
1. Для защиты глаз от попадания брызг жидкого азота необходимо обязательно одевать очки (лучше автомобильные). Очки одевают при заправке сосуда Дьюара жидким азотом и извлечение из сосуда глубоко замороженного семени.
2. Все работы, которые специалисту приходится вести с жидким азотом необходимо проводить только в кожаных перчатках или рукавицах, которые легко можно сбросить взмахом кистей. Поэтому они должны быть свободными. Необходимость сбросить рукавицы или перчатки у специалиста возникает в том случае, если на них попал жидкий азот.
3. Если сосуд Дьюара имеет температуру окружающего воздуха (в начале использования или по другим причинам), то жидкий азот из транспортного резервуара заливают в него медленно. В это время категорически запрещается заглядывать в горловину сосуда для определения уровня жидкого азота. При быстром заполнение теплого сосуда Дьюара азотом, он может вылиться из сосуда из-за чрезмерного количества образующихся паров. Если азот переливают из одного сосуда в другой, то это делают мелкими порциями через 5-6 секунд. Жидкий азот в этом случае переливается с помощью широкой воронки.
4. В помещении пункта, где находится сосуд Дьюара с жидким азотом, обязательно должна быть форточка или помещение оборудуется принудительной вентиляцией. Не смотря на то, что азот является инертным газом, повышенное содержание его в воздухе уменьшает в последнем содержание кислорода. Поэтому пребывание в помещении пункта, где имеется повышенное содержание азота, вызывает головную боль.
5. Сосуды Дьюара для хранения замороженного семени в жидком азоте –двухстенные. Между этими стенками выкачен воздух – создан вакуум, за счет которого жидкий азот и сохраняется в сосуде более месяца. Сосуды Дьюара, которые потеряли вакуум, нельзя использовать в работе, т.к. хладоагент из них быстро испарится. Признаком потери вакуума является тонкий слой снега, которым обрастает сосуд в верхней своей части. Поэтому специалисты хозяйства должны в кратчайший срок заменить их на доброкачественные.
6. Техникам по искусственному осеменению категорически запрещается закрывать горловину сосуда Дьюара. Проникновение тепла из окружающего воздуха, вызывает испарение жидкого азота, что является нормальным процессом, за счет которого в сосуде создается низкая температура. При прекращении выхода испаряющегося азота из сосуда в атмосферу, давление внутри его повышается и сосуд может взорваться. Сосуды Дьюара следует закрывать специальными пробками с пазами, имеющимися для каждого сосуда. Если горловина сосуда обрастает льдом, то такие емкости к эксплуатации не допускаются, т.к. лед может вызвать закупорку сосуда и его взрыв.
7. При заливке сосудов Дьюара жидким азотом из транспортных резервуаров (ТРЖК) необходимо следить за тем, чтобы гибкий шланг был опущен до дна. Несоблюдение этого правила может привести к тому, что при случайном повышении давления в резервуаре, струя жидкого азота может выбросить конец шланга из горловины сосуда и облить стоящих рядом людей.
8. В практике искусственного осеменения обычно используют жидкий азот с примесью кислорода (около 4-5%). По этой причине в сосуде Дьюара на пункте может постепенно накапливаться жидкий кислород, т.к. температура сжижения его несколько ниже (-183°), чем у азота (-196°).Жидкий кислород может попадать в сосуд и из окружающего воздуха путем конденсации на внутренних стенках. По этой причине нельзя держать горловину сосуда открытой длительное время. Жидкий кислород, накапливающийся в сосуде Дьюара, взрывоопасен. Поэтому два раза в год сосуд необходимо опорожнять от остатков семени, накопившейся в емкости. Сливать обогащенную кислородом жидкость необходимо в безопасное место, очищенное от предметов органического происхождения: бумаги, дерева, навоза и, особенно, промасленных тряпок.
9. Лучше всего слив обогащенной кислородом жидкости производить во время очередной доставки жидкого азота на пункт искусственного осеменения. Одновременно производится и дезинфекция сосуда Дьюара путем ополаскивания его свежим жидким азотом, который практически стерилен. Перед опоражниванием сосуда, замороженное семя временно перегружают в запасной сосуд с жидким азотом.
10. Посещение пункта искусственного осеменения посторонними лицами категорически запрещен. Это делается во избежании заноса на пункт различных патогенных микроорганизмов.
При хранении семени на пункте искусственного осеменения необходимо иметь в виду, что микроорганизмы могут сохранятся в жидком азоте сосуда Дьюара. Отсюда они попадают на гранулы замороженного семени и с ним в половые пути коров, а это, как отмечалось выше, может стать причиной эмбриональной смертности зародышей. Отсюда техник по искусственному осеменению не должен допускать попадания микроорганизмов в жидкий азот.
Горловину сосуда Дьюара, не следует оставлять открытой. Перед замером уровня жидкого азота палку, с помощью которой это делается, обрабатывают спиртовым тампоном. Пинцет, которым техник по искусственному осеменению достает гранулы из сосуда, также должен быть стерильным. Сосуд Дьюара должен периодически обрабатываться.
Чтобы уменьшить потери холода, мы завернули сосуд в теплоизолятор - вспененный полиэтилен фольгированный. Для наблюдения за содержимым сосуда в слое теплоизоляции сделали два окошка, которые заклеили скочем, чтобы легче было протирать.
Даже в таком сосуде азот кипит довольно бурно, потери тепла все равно значительны - окошка постепенно покрываются инеем. Лучше, конечно, чем без изоляции, но с сосудом, имеющим серебряное покрытие, не сравнить .
За кипением азота в сосуде с окошком удобно наблюдать визуально, - особенно если подсветить, но фотоаппарат в данном случае передает картину плохо.
_________________________________________________
Для иллюстрации cказанного приведем фрагмент книги Г. Лукс Экспериментальные методы в неорганической химии. Фундаментальный практикум по неорганической химии для аспирантов и научных работников
:
Для хранения жидкого воздуха наиболее пригодны сосуды Дьюара с относительно узким горлом. В этом случае количество жидкого воздуха, испаряющегося в единицу времени, не зависит от степени наполнения. Приведенные в таблице данные получены для шарообразного сосуда с двойными стенками емкостью 2 л и горлом диаметром 3 см. Изолирующая способность зависит в первую очередь от качества вакуума и серебряного покрытия. При понижении давления примерно до 10 -3 мм рт. ст. уменьшение испарения является приблизительно линейной функцией логарифма давления; только при давлении ниже 10 -6 мм рт. ст. потери от испарения остаются постоянными. Различие между сосудами без серебряного покрытия и серебряными сосудами, как видно, очень существенно: серебряная поверхность, очевидно, предотвращает поглощение лучистой энергии из окружающего пространства. При температурах выше 100° применение непосеребренных сосудов почти совершенно бесполезно. Однако для удобства установления уровня жидкости или производства наблюдений часто применяют сосуды, посеребренная поверхность которых прорезана вертикальной смотровой полосой шириной 0.5-2 см; такие сосуды, по-видимому, значительно чувствительнее к жидкому воздуху.
Таблица. Потери жидкого воздуха, связанные с испарением из сосудов с вакуумной рубашкой
Очень заметное понижение скорости испарения достигается, если закрыть горло сосуда пробкой из ваты и упаковать весь сосуд в вату. Если пробку из ваты удалить, потери возрастают приблизительно на 5%; еще большие потери наблюдаются, естественно, в случае открытых цилиндрических сосудов. В лучшем случае потеря за счет испарения (185 г) распределяется примерно следующим образом: поглощение лучистой энергии через горло - 20 г, потеря тепла через стеклянные стенки горла - 38 г, теплообмен за счет излучения через внешние стенки - 127 г.
Подготовка инструментов и техника искусственного осеменения крупного рогатого скота визо-цервикальным способом, глубокоцервикальным способом с фиксацией шейки матки через прямую кишку, маноцервикальным способом. Подготовка пистолета к осеменению. 1. Подготовка техника к работе, расстановка инструментов Техник-биолог в белом халате и в головном уборе с чисто вымытыми руками заходит в лабораторию, включает бактерицидную лампу. Из хирургического шкафа достаёт тампоницу с тампонами, пропитанными 96% спиртом ставит на стол. Из сушильного шкафа достаёт маленький пинцет, берёт им первый тампон. Не выпуская пинцета из рук, тщательно обеззараживает руки и затем стол в шахматном порядке. Затем из шкафа достаёт чашку для отходов, обрабатывает дно чашки 1-м тампоном. 2-й тампон ИЗ ХИРУРГИЧЕСКОГО СТОЛА достаёт подставку, длинный пинцет, ножницы, осеменительный инструмент - пистолет. Обтирает подставку - в начале рёбрышки, затем полочки и дно. Обтирает длинный пинцет и кладёт его на подставку. Обтирает ножницы и кладёт их на подставку. Обтирает пистолет сверху к толкателю, оттягивает толкатель на размер пайеты 9 см, кладёт его на поставку. Достаёт две одноразовые перчатки, располагает на столе. Обтирает ручку сушильного шкафа, достаёт покровные и предметные стёкла, располагает ближе к микроскопу на столе. Затем этим же тампоном обрабатывает тампоницу с тампонами пропитанными 96% спиртом. После обработки ставит на стол. Достаёт остальные нужные тампоницы и каждую обрабатывает. Тампоницу с тампонами, пропитаными физраствором, ставят на стол рядом с предыдущей тампоницей, а тампоницу с тампонами, пропитаными дезинфицирующим раствором, ставят на край стола рядом с чашкой для отходов. Затем обрабатывают чашку Петри и ставят на столе ближе к сосуду Дьюара. Не выпуская из рук тампон, достаёт из хирургического шкафа чашку Петри с салфетками в закрытом состоянии, обтирает её ставит на стол 2-й тампон выбрасывает. 2. Достает из хирургического шкафа полотенце маленькое на ручку сосуда Дьюара. Маленьким пинцетом из чашки Петри достает салфетку и кладет ее в чашку Петри, стоящую рядом с сосудом Дьюара, для тампонов из канистры сосуда Дьюара. 3. Готовим микроскоп к работе. Снимаем чехол с микроскопа, включаем столик Морозова, освещение. проверяем окуляр, объектив, увеличение должно быть в 120 (140-200) раз. Берет маленьким пинцетом 3-й тампон. Снимает макро и микрочастицы с окуляра и зеркала. Протирает столик Морозова. На столик Морозова кладет предметное и покровное стекла (на этап работы в лаборатории допускается достает из сушильного шкафа предметные и покровные стекла). Затем из водяной бани (термостат) убирает штатив в определенное место и этим е тампоном (3-м тампоном) обтирают края водяной бани, включая ее. Определив температуру водяной бани 38 градусов +- 0,5 градусник тоже убирает в определенное место или кладет на стол, но только на салфетку. Стол готов к разморозке. Мано-цервикальный способ искусственного осеменения. Сперму в полиэтиленовой ампуле, соединенной со стерильным полиэтиленовым катетером, вводят на достаточную глубину в канал шейки матки непосредственно рукой в полиэтиленовой перчатке. Этот способ применим только для коров, у телок вследствие узости влагалища и во избежание его разрывов данный способ не применяют. В набор инструментов для осеменения коров мано-цервикальным способом входят: 1) катетеры в упаковке и без нее (катетеры стерильные, из нетоксичного для спермы полиэтилена длиной 75мм; 2) стерильная ампула из нетоксичного для спермы полиэтилена, имеющая форму усеченного конуса длиной 48 мм; 3)Стерильная полиэтиленовая перчатка длиной 850 мм с толщиной пленки 30-40 мкм; Животное фиксируют. Подготавливают инструменты. Для этого полиэтиленовую ампулу присоединяют к катетеру (предварительно биотехник протирает пакет с ампулами тампоном, смоченным 96 0 -ным спиртом и стерильными ножницами надрезает полиэтиленовый пакет с ампулами, также поступает с пакетом, где находятся катетеры, после извлечения ампулы и катетера пакеты запаиваются на пламени горелки). Далее из сосуда Дъюара биотехник достает гранулу со спермой. Проводят размораживание и оценку спермы по определенной методике. Затем ампулу сдавливают для удаления из нее воздуха и засасывают порцию оттаянного семени. Положив инструменты на стерильную подставку, техник надевает стерильную полиэтиленовую перчатку и смачивает её 0,9 %- ным раствором хлористого натрия. Далее осторожно вводит руку во влагалище коровы и определяет степень раскрытия шейки матки. Вызвав сокращение матки, техник снимает пальцами слизь, прилипшую к шейке матки. Затем, не вынимая руки из влагалища, другой рукой подает подготовленную для осеменения ампулу, соединенную с укороченным катетером. Массируя шейку матки кончиками пальцев, подталкивает ампулу ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на глубину 6 7 см) не войдёт в канал шейки матки. После этого приподнимает ампулу вверх на 2-3 см (угол наклона 15 – 20 0) и выдавливает из неё сперму большим и указательным пальцами в момент расслабления шейки, т.е. всасывающего действия матки. Не разжимая ампулы, техник извлекает катетер из канала шейки матки и, положив катетер, соединенный с ампулой на дно влагалища, дополнительно массирует шейку матки. Далее с осторожностью вынимает из влагалища руку с инструментом. Инстумент и перчатка после осеменения уничтожается. После осеменения корова выдерживается на привязи в стойле до прекращения признаков охоты.



Обслуживающий персонал должен иметь одежду, полностью закрывающую поверхность тела. Необходимо пользоваться рукавицами ГОСТ 12.4.010, очками ГОСТ 12.4.013 или щитком из оргстекла. Следует избегать прикосновения оголенных поверхностей тела к металлическим деталям, охлажденным жидким азотом.
2. Помещение, где проводятся работы с жидким азотом, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. При заполнении сосудов не допускается перелив жидкого азота через горловину на пол.
3. Горловину сосуда следует закрывать только штатной вставкой, имеющей каналы для сброса паров азота из сосуда.
4. Во избежание повышенной испаряемости азота, не рекомендуется располагать сосуды вблизи отопительных приборов или на прямом солнечном свету.
5. При появлении на поверхности крышки сосуда инея или «снеговой шубы», слой которого увеличивается по мере испарения азота, что является признаком потери вакуума в изоляционной полости сосуда, необходимо немедленно переложить запасы биоматериала в исправный сосуд, затем слить жидкий азот и поставить дефектный сосуд га отогрев в течение двух суток в помещение с ограниченным доступом людей.
Указанные меры необходимы для предотвращения возможного разрушения сосуда за счет выделения газов при отогреве адсорбента.
Подготовка изделия к работе
1. Подготовка сосуда к работе заключается в проведении внешнего осмотра сосуда, стабилизации испаряемости, загрузке канистр с биопродуктом и дозаправке.
2. При внешнем осмотре проверяется отсутствие вмятин и трещин на кожухе, целостность вставки и загрязнение внутренней полости сосуда.
При наличии вмятин на кожухе, сосуд необходимо залить жидким азотом и проверить отсутствие обмерзания кожуха. Загрязнение внутренней полости сосуда устраняется теплой водой с моющими растворами. После промывки сосуд нужно тщательно просушить.
3. производится через заправочный шланг транспортной цистерны или воронку. Заправка производится малыми порциями жидкого азота, избегая перекрытия сечения горловины струей азота и перелива его через горловину. Конец воронки должен быть опушен ниже основания горловины.
4. После окончания заправки выдержать сосуд Дьюара в течение 5-6 часов для стабилизации теплового режима и прекращения бурного кипения жидкости.
5. Загрузка канистр с биопродуктом производить медленно спуская их в жидкий азот. Ручки канистр установить в прорези на верхнем торце горловины сосуда Дьюара, расположив канистры равномерно по окружности.
6. После загрузки канистр с биопродуктами, дозаправить жидким азотом до нижнего среза горловины, установить в горловину вставку и закрыть крышкой.
Порядок работы
1. и канистрами сосуд Дьюара установить на место эксплуатации. Периодически проверять, уровень жидкого азота в . Проверку уровня производить специальным шупом или чистой тонкостенной металлической трубкой. Резкий выброс паров азота из трубки означает, что трубка коснулась зеркала жидкости.
2. рекомендуется производить после остатка в сосуде Дьюара 25-15% объема жидкого азота. Периодичность дозаправок зависит от количества загрузок канистрами. Поэтому рекомендуется при эксплуатации как можно реже открывать сосуд Дьюара и извлекать канистры.
3. опорожнять сосуд Дьюара от жидкого азота следует переворачиванием его или выдавливанием газообразным азотом давлением до 0,03 МПа (0,3 кг/см) с помощью специального приспособления.
Техническое обслуживание
Техническое обслуживание заключается в периодической, не реже 1 раза в год, промывке внутренней полости сосуда Дьюара и канистр от грязи. Промывку производить теплой водой и моющими растворами по технологии потребителя . После промывки сосуд Дьюара необходимо тщательно просушить.
Возможные неисправности и способы их устранения
1. Основной возможной неисправности сосуда Дьюара является потеря вакуума в изоляционном пространстве, сопровождающаяся следующими характерными признаками:
— повышенная испаряемость жидкого азота при бурном его кипении в сосуде Дьюара;
— обмерзание горловины или кожуха сосуда Дьюара;
2. Конструкция сосуда Дьюара не позволяет силами потребителя без привлечения специализированной организации.
Известный каждому атмосферный азот, сам по себе, является абсолютно безопасным для окружающей среды. Этот элемент не опасен, не обладает токсичностью и не влияет на природу. В то же время он способен негативно действовать на организм человека и животных, так как имеет высокую инертность. В случае слишком высокого давления азот способствует появлению состояния опьянения, наркоза и удушья в случае возникновения недостатка кислорода. При резком понижении возможно появление кессонной болезни.
Правила работы с жидким азотом
Если вы работаете с азотом, вам необходимо помнить следующее:
- Азот, который находится в баллонах, не обладает токсичностью и не взрывается;
- В жидком состоянии при попадании на кожу вызывает обморожение пораженных участков, а при попадании в глаза – поражает слизистую оболочку;
- Если уровень кислорода в азоте превысит порог 30% , получается взрывоопасное сочетание. Поэтому во время проведения любых действий при помощи этого элемента в открытых емкостях, следите, чтобы поблизости не было растворителей на органической основе, масел и иных веществ, которые могут способствовать созданию взрывоопасной ситуации;
- Не используйте азот до тех пор, пока не проверите уровень содержания кислорода в жидкости. Азот сливается на специально оборудованных для этого площадках, на которых не должно быть элементов из дерева, асфальта и прочих органических соединений;
- Если емкость, с которой предстоит работать уже была в эксплуатации, необходимо сделать продувку воздухом. Обратите внимание на то, что до начала проведения работ емкость должна быть прогрета до температуры воздуха. Эту процедуру совершают перед ремонтными работами;
- Приступайте к выполнению работ только после того, как убедитесь в низкой концентрации кислорода в азоте. На общий объем смеси он не должен превышать 19%;
- В случае выполнения работ в азотном слое, используйте шланговые противогазы или специальные кислородные приборы во избежание отравления.